|
| 產地 | 進口、國產 |
| 品牌 | 聯祖 |
| 貨號 | LZR86142 |
| 用途 | 公司產品僅用于科研 |
| 包裝規格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 是 |
產品特點：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
參數規格：
產品名稱：轉基因構建FMV啟動子-PLRY基因PCR試劑盒說明書
貨號：LZR86142
產品規格：50次
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：
產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
需要注意：
PCR反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應，增強PCR擴增的特異性，能得到良好的PCR結果。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環。
如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成；而Extension時間太長時，會出現Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳（本產品不需要單獨加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。
二反應的準備：
待各組份融化后先瞬時離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系，每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照，測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;八個循環開始，每循環退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個循環開始，反應條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環32次;循環結束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
標準操作步驟：
產品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，轉速（>13000×g）離心空結合柱1min以干燥柱子的基質；這一步對下面的洗脫步驟至關重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
40%Acrylamide/Bisacrylamide(37.5:1) 含量：暫不提供 規格：1ml，3ml
過銨APS 含量：暫不提供 規格：50次，200次
Ammonium persulfate 含量：暫不提供 規格：50μl，250μl
抗熒光衰減封片劑(強） 含量：暫不提供 規格：50μl，250μl
Antifade Mounting Medium 含量：暫不提供 規格：20次，50次
細胞凋亡與壞死檢測試劑盒 含量：暫不提供 規格：20次，50次
Apoptosis and Necrosis Assay Kit 含量：暫不提供 規格：50次，100次
細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒 含量：暫不提供 規格：50次，100次
酰白藜蘆;Acetyltrans CAS號： 42206940 規格： 20mg 訂購|咨詢
羊藿次苷II;Icarisid II CAS號： 113558159 規格： 20mg 訂購|咨詢
茵芋苷;Skimmin CAS號： 93390 規格： 20mg 訂購|咨詢
亞油;Methyl Linolea CAS號： 112630 規格： 100mg 訂購|咨詢
油;Methyl Oleate CAS號： 112629 規格： 100mg 訂購|咨詢
硬脂;Methyl Stearat CAS號： 112618 規格： 50mg 訂購|咨詢
酰蒲公英萜;Taraxeryl ac CAS號： 2189802 規格： 20mg 訂購|咨詢
異古倫賓;IsocoluMbin CAS號： 471545 規格： 20mg 訂購|咨詢
吲哚;6Hydroxyindole CAS號： 2380861 規格： 20mg 訂購|咨詢
原七葉皂苷元;Protoaescigen CAS號： 20853070 規格： 20mg 訂購|咨詢
鹽吐根;EMetine Hydroc CAS號： 316427 規格： 20mg 訂購|咨詢
氧血根堿;Ethoxysanguin CAS號： 28342316 規格： 20mg 訂購|咨詢
遠華蟾蜍精;Telocinobufagi CAS號： 472264 規格： 20mg 訂購|咨詢
氧槐定堿;Oxysophoridine CAS號： 54809744 規格： 20mg 訂購|咨詢
薏苡素;Coixol CAS號： 532912 規格： 20mg 訂購|咨詢
N,N′-Diphenylthiourea,98%大鼠干擾素誘導蛋白10(IP-10/CXCL10) 進口/國產
2-Imidazolidinetione,≥98.0%人凝溶膠蛋白(Gelsolin) 進口/國產
Allyl thiourea,98%小鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin) 進口/國產
N-Phenylurea,97%大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin) 進口/國產
Aminourea hydrochloride,≥99%人結蛋白(Des) 進口/國產
Tetramethylurea,99%小鼠結蛋白(Des) 進口/國產
Acetone semicarbazone,97%大鼠結蛋白(Des) 進口/國產
Thiurea dioxide,≥98%人心肌轉錄因子GATA4 進口/國產
轉基因構建FMV啟動子-PLRY基因PCR試劑盒說明書Alcanivorax│venustensis分離基物: 沉積物/TVMC沉積物/TVMC沉積物/TVMC沉積物(21-25cm)提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養基: 821生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法
Azotobacter│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 固氮。培養基: 3生長條件: 28-30存儲條件: 定期移植法
Rhizoctonia│solani提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用于水稻紋枯病菌的多樣性研究培養基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Aspergillus│niger提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 定期移植法
Acremonium│sp.分離基物: 水樣/下層海水提供形式: 斜面培養物模式菌株: no應用領域: 大洋絲狀真菌培養基: 475生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法
Lentinula│edodes提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；礦物油法；定期移植法
Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 釀造葡萄酒。培養基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法
Penicillium│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 生理活性物質；退行性疾病培養基: CM0014生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結
Verticillium│dahliae提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 25℃
