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上海聯祖生物科技有限公司
產品展廳
轉基因品系玉米T14探針法qPCR試劑盒供應商
  • 品牌:聯祖
  • 產地:進口、國產
  • 貨號:LZR85993
  • 發布日期: 2020-11-26
  • 更新日期: 2025-10-20
產品詳請
產地 進口、國產
品牌 聯祖
貨號 LZR85993
用途 公司產品僅用于科研
包裝規格 50次
純度 %
CAS編號
是否進口

參數規格:

產品名稱:轉基因品系玉米T14探針法qPCR試劑盒供應商

貨號:LZR85993

產品規格:50次

產品運輸:低溫運輸

產品保存:-20℃保存

產品有效期:一年

產品特點:

產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

 

需要注意:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環次數

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。

如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。

二反應的準備:   

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環:94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;從八個循環開始,每循環退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環32次;循環結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

核糖英文名稱:Ribostamycin大鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒規格:200mg保存:-20℃,避光

鶴虱英文名稱:Lappula echinata雞抗體(IC)ELISA試劑盒規格:2g保存:-20℃,避光

黑豆英文名稱:Black beans人c-myc癌因產物(c-myc)ELISA試劑盒規格:5g保存:-20℃,避光

黑老虎根英文名稱:The black tiger root大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒規格:2g保存:-20℃,避光

黑螞蟻英文名稱:The black ant人抗子宮內膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒規格:4g保存:-20℃,避光

黑芝麻英文名稱:Black sesame大鼠孕受體(PGR)ELISA試劑盒 規格:1g保存:-20℃,避光

黑種草子英文名稱:Nigella glandulifera preyn大鼠緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒規格:5g保存:-20℃,避光

紅英文名稱:Erythromycin大鼠抗促狀腺素受體抗體(TRAb)ELISA試劑盒規格:200mg保存:-20℃,避光

紅參英文名稱:Red ginseng人1,3-二磷甘油(1,3-DPG)ELISA試劑盒規格:1g保存:-20℃,避光

紅參蘆英文名稱:Red ginseng reed大鼠能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒 規格:0.2g保存:-20℃,避光

紅穿破石英文名稱:Red chuanposhi人抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒規格:1g保存:-20℃,避光

紅大戟英文名稱:Knoxia valerianoides雞三碘狀腺原(T3)ELISA試劑盒規格:3g保存:-20℃,避光

紅豆蔻英文名稱:Alpinia galanga人Ⅰ型前膠原羧端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒規格:1g保存:-20℃,避光

紅杜仲英文名稱:Hong Duzhong人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA試劑盒 規格:0.5g保存:-20℃,避光

紅花英文名稱:Safflower人TU3A蛋白(TU3A)ELISA試劑盒規格:0.5g保存:-20℃,避光

Alcohol Oxidase雞抗體IgG(JE IgG) 進口/國產

Acetyl CoA trilithium salt,≥93%人抗體IgG(JE IgG) 進口/國產

2,4-Dimethyl-1H-pyrrole,97%人α羥丁脫酶(αHBDH) 進口/國產

Ethyl oxamate,98%小鼠α羥丁脫酶(αHBDH) 進口/國產

4-Amino-1-naphthalenesulfonic acid sod...人Ⅳ型膠原(Col Ⅳ) 進口/國產

β-Sitosteryl acetate,97%小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ) 進口/國產

Tranexamic acid,97%大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ) 進口/國產

4-Phenylbutyric acid,99%人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE) 進口/國產
轉基因品系玉米T14探針法qPCR試劑盒供應商Micromonospora│echinospora分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 土壤微生物資源調查及分類學研究培養基: 394生長條件: 35℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Brevibacterium│casei分離基物: 水樣/下層海水提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 深海細菌培養基: 471生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Pythium│falciforme提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0421生長條件: 25℃

Alternaria│sp.分離基物: 植物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 18-26℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Claviceps│oryzae-sativae分離基物: 水稻品種兩優培九提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 教學研究培養基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Pestalotiopsis│sp.分離基物: 植物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Aspergillus│niger提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 定期移植法

Lactobacillus│pentosus分離基物: 萵筍泡菜提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 發酵泡菜制品。培養基: CM0006生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Pseudoalteromonas│issachenkonii分離基物: 水樣/海冰提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: *微生物/耐冷菌培養基: 471生長條件: 20℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
標準操作步驟:

產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,*轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。


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